序号

实验项目名称

实验类型

项目

学时数

分组

人数

实验项目

内容及要求

指导重难点分析

备注

1

天然材料中联产提取制备生物产品弹性蛋白酶、胰岛素及分析鉴定

验证性

27

2

内容：

实验守则、安全守则。

通过离子交换层析制备胰弹性蛋白酶。

以刚果红弹性蛋白为底物采用比色法测定酶活力。

通过酸醇提取减压浓缩法提取胰岛素粗品。

通过酶联免疫法检测胰岛素活性。

要求：

掌握胰岛素和弹性蛋白酶联产制备的原理

掌握胰岛素和弹性蛋白酶含量测定的方法。

了解胰岛素和弹性蛋白酶的药用价值

重点：胰岛素和胰弹性蛋白酶的制备和检测。

难点：旋转蒸发仪的使用和ELISA检测法

2

真菌多糖的制备及分析

验证性

16

2

实验内容：水提法提取真菌的不同多糖组分。

要求：

1. 学习热水提取金针菇多糖的方法。

2. 掌握乙醇分级沉淀制备不同的多糖组分。

3. 学习多糖酸水解生成单糖的原理与方法。

4.掌握薄层层析鉴定单糖组成。

单糖薄层层析实验过程中，层析液配制、样品点样及层析展开时，有许多细节会影响实验结果，需要进行针对性指导。

3

氯化血红素的制备及分析

验证性

12

2

实验内容：以猪血为原料，通过酸性丙酮提取氯化血红素。

要求：

1.了解血液抗凝原理及抗凝血制备方法；

2.掌握红血球蒸馏水胀溶法；

3.掌握旋转蒸发仪的使用方法。

4.掌握氯化血红素含量测定的方法。

含丙酮溶液沸点低，容易暴沸；同时，在负压条件下旋转蒸发，操作不当均容易导致样品旋转蒸发失败。

4

酶生物转化法生产L-天冬氨酸及分析鉴定

验证性

18

2

内容:

包埋法制备固定化细胞。

通过生物反应器生产L-天冬氨酸。

要求：

1.了解细胞固定化常用的方法,学习包埋法制备固定化细胞。

2.掌握固定化细胞法生产L－天冬氨酸的原理及基本操作。

3.掌握固定化细胞酶活力、转化率的原理或方法。

重点：

固定化细胞的制备和检测

难点：

反应器的组装和实验结果计算

5

重组分泌型门冬酰胺酶II的工程菌的构建、发酵表达及重组蛋白的制备、分析

综合性

54+4

2

内容：

1.构建表达分泌型门冬酰胺酶II的基因工程菌。

2.发酵生产门冬酰胺酶II。

3.分离纯化门冬酰胺酶II并进行酶活力、蛋白含量及SDS-PAGE电泳分析。

4. 重组门冬酰胺酶II的酶活力测定、蛋白含量及SDS-PAGE纯度分析。

5.实验前通过虚拟仿真学习实验流程，实验后通过虚拟仿真学习放大生产过程。

要求：

1.掌握采用pET22b质粒构建重组表达载体的方法，包括PCR技术、酶切、连接、感受态细胞的制备、转化、表达载体的验证等方法。

2.掌握重组工程菌培养、诱导表达重组门冬酰胺酶II的原理。

3.掌握镍柱分离纯化带有组氨酸标签的重组蛋白质的方法。

4.掌握SDS-PAGE分析重组蛋白大小、BCA法测定蛋白含量及奈氏试剂测定酶活力的方法。

5.掌握制药企业放大生产门冬酰胺酶的方法。

重组质粒的转化需要严格遵守无菌操作，存在一定难度；

酶的活性分析实验受pH值影响较大，需严格按实验规程操作；虚拟仿真模块涉及自行设计引物，需根据不同理论课所学知识合理设计。

虚拟仿真涵盖实验设计、小试工艺和放大生产三大层次。

计4学时。

6

重组门冬酰胺酶II的制备与分析

设计性研究

9

4

内容：

根据实验题目、自选角度、参考文献，在小组讨论的基础上设计实验。

根究设计方案，制作PPT，并进行汇报讨论。

要求：

掌握查阅文献及文献综述的能力。

培养自我选题、实验设计的能力。

锻炼撰写实验论文的能力及做学术报告的能力。

要求学生对实验过程出现的问题进行分析，提出解决方法优化实验方案，对学生的观察能力、提出问题和解决问题的能力有一定要求。